Kamariddin Shamsiev Малёк 39 1 3 года	Ответить микроклональное размножение аквариумных растений
	Оказывается трилон Б вовсе не обязателен (получен мною совет от профессионала - специалиста по in vitro с.х. культур к.х.н. ). Сульфаты хорошо растворяются каждый отдельно. Все компоненты собраны по Андерсону модернизированный (макро-, микро-, витамины и прочие). Электронные весы 50 граммовые (точность 0.00) и бактерицидная лампа ДБ -30 с корпусом имеются. Возникают вопросы: 1. уф стерилизация пластиковой посуды банок с крышками 2 видов и бумага для препарирования; 2. уф обработка помещения 60 м3 Лампа будет находится над посудой и инструментами. Предварительно пластиковая посуда будет обработана перекисью водорода. Фрагменты растения будут обработаны доместосом маганцовкой и перекисью водорода по 3 минуты. Я посчитал примерно после включения лампы 5 минут будет достаточно, что бы работать в помещении его не проветривая. Инструменты будут обмакиваться в спирте. И каждые 5 минут работы будет распылятся спирт. 7 раз отмерь 1 раз отрежь.Что здесь не правильно?
	2020-04-1212/04/2020 12:16:50 #2770349

Старец Свой на Aqa.ru 2253 1866 Москва 10 час.	Ответить
	Kamariddin Shamsiev Вообще, лучше бы вам сделать и использовать для стерильных работ перчаточный бокс, типа такого: . Помню у нас он был самодельный из орг стекла. Внутри висела УФ-лампа (внутренняя часть, без люминофора, от лампы ДРЛ-500). Колбы для пересадки и посадочный материал заносились во внутрь бокса. Перед работай бокс обильно протирался спиртом, а затем обрабатывался УФ-излучением 15 мин. Сам процесс пересадки растительной ткани происходил внутри, в пламени спиртовой горелки. Агаризированная питательная среда предварительно стерилизовалась в автоклаве при 0,8 ати. приблизительно 115 градусов, около 15-30 минут (уже не помню). Наверное можно использовать скороварку. Пластик тогда не использовался в этих работах. Все делали в стекле - in vitro.))) Когда стали использовать бокс-комната, объемом приблизительно 4-6 м3. то для стерилизации помещения использовали две УФ лампы 30 ваттные и тоже 15-20 минут, затем перерыв на 30 минут, чтобы ушел озон. Затем заходила лаборантка, переодевалась в стерильный халат, маску и тоже в пламени горелки происходил процесс пересадки. Так же, бокс обрабатывался спиртом и хлорамином. Ну, а когда появились ламинарные боксы, все стало еще легче. Брак, конечно был, но минимальный. С пластиком не работал, не знаю. Но, наверное в интернете есть ссылки на современные подобные технологии. Можете посмотреть на сайте ИФР (Институт физиологии растений АН РСФСР). Не знаю, так ли он сейчас называется, но они были (в то время) на острие атаки, по этим технологиям.
	2020-04-1212/04/2020 13:11:07 #2770379 Нравится анаксагор, Kamariddin Shamsiev, папоротник

папоротник Свой на Aqa.ru, Советник 1 30890 19614 Москва 11 час.	Ответить
	Kamariddin Shamsiev канал на youtube "Владимир Маркин ОРХИДЕИ В РОССИИ" - было несколько видео по домашней лаборатории с ламинарным боксом и т.д.
	2020-04-1212/04/2020 13:27:01 #2770389

Kamariddin Shamsiev Малёк 39 1 3 года	Ответить
	ламинарный бокс - аквариум на 60 литров (для процедур) и на 40 литров (для посуды пластиковой и другой и бумаги и инструментов) лампы ДБ-30 и обычную лампу 120 мм ставим на них. Затем переворачиваем пустой стороной к себе. По орхидеям и прочим растениям in vitro уже 1 месяц назад просмотрел и статьи научные по биотехнологии прочитал штук 10. По озону 2 грамма на м3 критично для дыхания это 20 минут на 96 м3 а 3-5 минут работы лампы это 0.3-0.5 граммов на м3 по моим расчетам и можно работать не проветривая помещения зачем удалять озон - это самый эффективный антисептик. Вместо спиртовки - обычная газовая горелка. Вместо колб огнеупорных - эмалированная кастрюля на 2 литра и вместо пробирок и чашек петри - пластиковая посуда. Изменено 12.4.20 автор Kamariddin Shamsiev
	2020-04-1212/04/2020 15:09:37 #2770424

Kamariddin Shamsiev Малёк 39 1 3 года	Ответить
	Старец такой перчаточный бокс годится и для работы с животными клетками
	2020-04-1212/04/2020 15:26:48 #2770427

Старец Свой на Aqa.ru 2253 1866 Москва 10 час.	Ответить
	Kamariddin Shamsiev Не знаю, я работал с растительными клетками и не как технолог, а как инженер. А какая разница, сейчас, везде применяют ламинарные боксы.
	2020-04-1212/04/2020 16:41:52 #2770448 Нравится анаксагор

Kamariddin Shamsiev Малёк 39 1 3 года	Ответить
	Старец Я про читал статью про пластик он тонкий пропускает полностью уф 253 нанометров в отличии от 6 мм обычного стекла 50-70% энергии задерживается, так что с пластиковой посудой стоит попробовать.
	2020-04-1212/04/2020 17:15:47 #2770454

Старец Свой на Aqa.ru 2253 1866 Москва 10 час.	Ответить
	Kamariddin Shamsiev Да, некоторый пластик пропускает УФ-излучение. Помню, в ламинарных боксах (ФРГ) которые были у нас, УФ-лампы стаяли за защитой из прозрачного пластика и вполне хорошо обеззараживали столешницу из нержавеющей стали и стенки бокса покрытые пластиком. Но сможет ли ультрафиолет стерилизовать вашу посуду и питательную среду (убить споры) определять вам. Пробуйте, если получится, значит, удача. У нас были автоклавы, это 100% успех. Жидкие питательные среды, стерилизовали фильтрацией, аппаратура фирмы "Милипор", но стекло, инструменты все равно автоклавировали. Извините, сейчас, я не слежу за новинками по этой технологии, мои познания в этой области относятся к 70-90 годам, прошлого века, когда я работал в НИИ. Думаю, вы зря хотите сразу начинать использовать пластик, стекло было бы более оправдано для работы в домашних условиях, так так многие проблемы устраняет именно нагрев такой посуды. Просмотрите внимательно видео, которые вам посоветовал lonelity, в частности: видео " Принципиальное устройство Ламинара. Ламинар своими руками" и "Работа с культуральной Посудой" это работы по старой технологии, которую не трудно осуществить в домашних условиях. Изменено 12.4.20 автор Старец Изменено 12.4.20 автор Старец
	2020-04-1212/04/2020 18:39:50 #2770477

Kamariddin Shamsiev Малёк 39 1 3 года	Ответить
	Старец Мы опираемся на Исследования по уничтожению микроорганизмов озоном https://vozdyx.ru/ar... и УФ https://www.who.int/... и уф http://www.businessp... и уф https://habr.com/ru/... Для обеззараживания предметов обихода (посуды, столовых приборов, парикмахерского и лабораторного инструмента, игрушек и т.п.) используются боксы, шкафы или небольшие контейнеры с решетчатыми полками, на которых располагаются предметы, облучаемые бактерицидными лампами, расположенными таким образом, чтобы облучать эти предметы, по крайней мере, с верхней и нижней сторон. Цель нашего исследования определить методы экономически эффективные (наименее трудо- и материалозатратные) при размножении клеток in vitro. Посуда из огнеупорного стекла в 100 раз дороже пластиковой так что стоит попробовать и найти решение. Изменено 13.4.20 автор Kamariddin Shamsiev
	2020-04-1313/04/2020 07:38:30 #2770715

Старец Свой на Aqa.ru 2253 1866 Москва 10 час.	Ответить
	Kamariddin Shamsiev Есть стерилизация, есть дезинфекция. При стерилизации происходит полное разрушение, как вегетативное формы микроорганизма, так и его спор. При дезинфекции достаточно уничтожить только вегетативную форму. Your text to link here... Мы использовали: УФ-излучение, хим препараты (спирт и хлорамин...) , кипячение, озонирование, как способы дезинфекции, а автоклавирование, как способ стерилизации в работе с клетками высших растений. Пробуйте свои методы, может, что-то и сработает. Выходом, нашей работы являлось, разработка промышленной технологии производства культур и клеток тканей высших растений. Которая впоследствии была внедрена на нескольких заводах Главмикробиопрома СССР. Поэтому мы и брали уже проверенные варианты обработки питательных сред, помещений и оборудования, принятые и утвержденные для работ на предприятиях нашего главка. У вас руки развязаны, поэтому можете использовать все что хотите, лишь бы получилось, главное, чтобы не во вред. Тогда, в наше время, было все наоборот стекло стоило дешевле пластика. Но мы использовали для производства стеклотару из пищевой промышленности (баночки из под сметаны, майонеза). Пробки сначала были ватно-марлевые, затем перешли на ал.фольгу.
	2020-04-1313/04/2020 10:48:27 #2770765 Нравится Kamariddin Shamsiev

Kamariddin Shamsiev Малёк 39 1 3 года	Ответить
	Аденин — одно из азотистых (пуриновых) оснований, входящих в ДНК (так называемый алфавит генетического кода). Широко распространен в живой природе, входит в состав нуклеиновых кислот и нуклеотидов, аденозина, аденозинфосфорных и других соединений. Аденин сульфат (Витамин B4) C5H5N5 найти его - это проблема . Можно-ли заменить аденин сульфат витамин B4 препаратом Нуклео ЦМФ Форте, который содержит ряд нуклеотидов: цитидина монофосфат (ЦМФ), уридина трифосфат (УТФ) или Сольгар РНК ДНК таблетки или Нуклеинат натрия или препаратами содержащими нуклеиновую кислоту? Изменено 13.4.20 автор Kamariddin Shamsiev
	2020-04-1313/04/2020 16:19:57 #2770873

анаксагор Завсегдатай, Кандидат в Советники 1233 1357 Москва 4 час.	Ответить
	Kamariddin Shamsiev Инструменты будут обмакиваться в спирте. И каждые 5 минут работы будет распылятся спирт. Учтите, что при открытом огне спиртовки, а тем более газовой горелки, распылять спирт нельзя. Я начинал работу с клетками животных и человека в пору, когда ламинарные боксы уже были в "природе", их не было у меня. Работали в стеклянном боксе в пламени спиртовки в четыре руки в радиусе 10-15см от огня. На стенах и над столом висели ртутные лампы для стерилизации бокса и рабочего места ультрафиолетом. Учтите, что УФ с длиной волны 253,7-257,5 нм опасен для незащищенных кожи и роговицы. На столе всегда открытая склянка со спиртом. Это очень опасно. Работать следует с большой осторожностью. Посуду использовали стеклянную, стерилизованную в сухожаровом шкафу. Пробки, крышки и одежду для работы (халаты, шапки, марлевые маски) автоклавировали. С обретением ламинарных шкафов ситуация переменилась принципиально. Сейчас использую стерильную одноразовую посуду, кстати ее стерилизуют радиацией. В свое время мы пытались наладить стерилизацию пластика гамма кобальтовой пушкой одного из институтов Минздрава. Для черновых работ, конечно, можно простерилизовать пластиковую посуду спиртом и высушить её под УФ, как можно ближе к лампе. Но, вы должны помнить, что это условная стерилизация. Среды я стерилизую фильтрованием через мембранные фильтры с диаметром пор 0,22мкм, а сыворотку или трипсин, возможно контаминированные микоплазмой, через фильтры 0,1 мкм. Вообще, в работе с культурами клеток и тканей проблема контаминации разными микроорганизмами и, особенно, микоплазмой, очень актуальна. Она губит всю работу иногда на завершающем этапе. Кстати, Старец дал вам очень практичные советы, например, использовать скороварку вместо автоклава. Мне пришлось так поступить во время одной командировки в азиатскую страну, где с оборудованием было трудно. Изменено 13.4.20 автор анаксагор
	2020-04-1314/04/2020 00:14:00 #2771085 Нравится Prionus, Button, Kamariddin Shamsiev, Старец

Kamariddin Shamsiev Малёк 39 1 3 года	Ответить
	анаксагор А если моденизировать эмалированную кастрюлю с крышкой и два болта из нержавейки установить для создания давления? Эмалированная кастрюля в 10 раз дешевле скороварки. Распылять перекись водорода и спирт только в выключенном состоянии приборов и горелки. Это аксиома! Хотя с замечанием и предложениями согласен полностью. Вы сами выбирали методы стерилизации или пользовались готовыми рекомендациями и опыты в этой связи проводили ? Один такой фильтр скорее всего стоит больше всего остального в 2-3 раза. Стерилизуют радиацией это вообще опасно, дорого и недоступно. Каким путем можно добиться полной стерилизации пластиковой посуды как можно ближе к уф и озон тяжелее воздуха и он должен оседать на пластиковую посуду и крышки, инструменты, маски, халаты и прочее и они должны находится в аквариумах под лампой уф с озоном. Озон в 1000 раз эффективнее хлора. Я где то читал, что некоторые бактерии выживают в ядерных реакторах, но не в озоне. Попробуем два варианта со скороваркой и кастрюлей. Кстати, в детствеl мне уколы делала медсестра и кипятила шприц в эмалированной кастрюле. Изменено 14.4.20 автор Kamariddin Shamsiev
	2020-04-1414/04/2020 15:01:11 #2771258

Старец Свой на Aqa.ru 2253 1866 Москва 10 час.	Ответить
	Kamariddin Shamsiev Автоклав: Your text to link here...
	2020-04-1414/04/2020 15:53:16 #2771289 Нравится анаксагор

анаксагор Завсегдатай, Кандидат в Советники 1233 1357 Москва 4 час.	Ответить
	Kamariddin Shamsiev Вы сами выбирали методы стерилизации или пользовались готовыми рекомендациями Это готовые рекомендации. Есть пособия по работе с культурами клеток. В домашних условиях трудно создать условия, необходимые для стерильной работы. А в подобной работе асептика и антисептика это главные киты этой области. Совершенная стерильность и применение антисептических средств (спирты, растворители, хлорсодержащие смеси). С кастрюлей и созданием давления в ней это тоже небезопасные эксперименты. В старшем классе в школе я был председателем биологического кружка и попросил знакомых студентов биологов достать линии мушки-дрозофилы для демонстрации опытов Менделя. Скороварки не было, да и не знали мы тогда про возможность ее использования вместо автоклава. Просто долго кипятили кормовую смесь перед заливкой пробирок. Очень скоро черная плесень погубила все линии дрозофил. Трудно в домашних условиях заниматься такими работами и сильно их не удешевить. Пробуйте. Определенного опыта наберетесь. Удачи. И помните о технике безопасности
	2020-04-1414/04/2020 17:44:39 #2771324 Нравится Kamariddin Shamsiev

папоротник Свой на Aqa.ru, Советник 1 30890 19614 Москва 11 час.	Ответить
	Kamariddin Shamsiev А если моденизировать эмалированную кастрюлю с крышкой и два болта из нержавейки установить для создания давления? без предохранительного клапана ни в коем случае. Иначе может к чертям разнести лабораторию.
	2020-04-1414/04/2020 17:52:05 #2771327 Нравится Kamariddin Shamsiev, анаксагор

анаксагор Завсегдатай, Кандидат в Советники 1233 1357 Москва 4 час.	Ответить
	Старец Спасибо за информацию! Мы купим такой на работу для "убивки" отработанных рекомбинантов.
	2020-04-1414/04/2020 17:52:13 #2771328

Kamariddin Shamsiev Малёк 39 1 3 года	Ответить
	Аденин сульфат - это проблема. Может заменить ауксинами (корневит или гетероауксин найти и цена препаратов не проблема) и цитокининами (кинетин и где его искать)?
	2020-04-1414/04/2020 20:21:07 #2771388

анаксагор Завсегдатай, Кандидат в Советники 1233 1357 Москва 4 час.	Ответить
	Kamariddin Shamsiev и цитокининами (кинетин и где его искать)? Попробуйте Цитокининовую пасту Производится ЭффектБио в виде порошка или готовой пасты, основу которой составляет бензиладенин. Кейкигроу плюс (Keikigrow Plus) ее полный аналог. .
	2020-04-1414/04/2020 22:29:03 #2771451

GIO Постоянный посетитель 794 174 Москва 10 дн.	Ответить
	Kamariddin Shamsiev микроклональное размножение Нет такого метода!!! Правильно "Клональное микроразмножение" и разница огромна! Если в серьезный рецензируемый журнал послать про "микроклональное размножение" то статья сразу отклоняется и хорошо если авторов не внесут в черный список. ТС стоит почитать побольше про данное направление, 10 статей это "ни о чем"... И про выращивание аквариумных растений in vitro, материалов в сети полно, лет 5-8 назад писал несколько отзывов (был бум какой то) на магистерские работы по "...Клональному микроразмножению акваримных растений ...", на различных этапах и подробно расписывались методики по этапам (И среда Андерсона не лучший вариант!). По работе делал несколько технологий под заказ под различные виды аквариумных растений. трилон Б во... Плохой совет! Будут проблемы, а некоторые вообще не будут расти. К тому же он хоть и слабый но буфер. [url=Kamariddin Shamsiev добавлено 14/04/2020 2007 Аденин сульфат - это проблема. Может заменить ауксинами (корневит или гетероауксин найти и цена препаратов не проблема) и цитокининами (кинетин и где его искать)?][/url] Стоит разобраться что такое цитокинины и ауксины, и для чего они нужны!!! [url=уничтожению микроорганизмов озоном... Для обеззараживания предметов обихода (посуды, столовых приборов, парикмахерского и лабораторного инструмента, игрушек и т.п.) используются боксы, шкафы или небольшие контейнеры ...[/url] Ключевое слово боксы, в помещении опасно (коллега из другого НИИ так "сожгла легкие", потом в больнице долго лежала) методы сте... Есть стерилизация дробным кипячением... Спирт плохой стерилизующий агент против бактерий..., на Бацюллюсов разных он не влияет вообще достаточно долгое время, а Бацюллюсы одни из основных "патогенов" ... Пластик хорошо стерилизуется в микроволновке!!! Берется пакет высокого давления (типа как для заморозки), посуда ополаскивается, стряхивается, но не до конца! Складывается в пакет, выпускается воздух по максимуму! Плотно завязывается по самому краю! Кладется в микроволновку на МАКС, и после разогрева начинает надувать пакет (вода превращается в пар) засекается 10-12 мин (стерилизация паром). И существует такой парадокс казалось бы сложные в размножении традиционными способами Орхидеи, самые самые простые в выращивании in vitro растения! В свое время об спор коллега "без спецоборудования" (в гостях) выращивал на "Растворине" и картофельном крахмале (единственный лабораторный компонент был только 6-БАП), развивали протокормы и потом росли почти как сорняки! Стоит поподробнее почитать, писать особо некогда, работа.
	2020-04-1414/04/2020 22:38:30 #2771454 Нравится prostovna, Prionus, Инед, Kamariddin Shamsiev, 0льчик и еще 2 пользователям

Kamariddin Shamsiev Малёк 39 1 3 года	Ответить
	GIO Нет такого метода!!! Автору глубокое уважение. Тогда тема будет перименована: "Размножение аквариумных растений in vitro: модернизация среды и процесса, на основе повышения экономической эффективности производства". Стоит разобраться что такое цитокинины и ауксины, и для чего они нужны!!! Ауксины - гормоны роста клеточной зеленой массы, а цитокинины - гормоны роста корневой массы. На первом этапе ауксинов в растворе должно быть больше 2 мг к 1 мг, а на втором, наоборот, 1 мг к 2 мг на литр раствора. Может, не правильно понял? Про вариант работы с пластиковой посудой и одноразовыми пластиковыми инструментами или другими - Класс и Ноу-хау!!! Попробуем с кастрюлей, скороваркой и микроволновкой и посудой пластиковой и стеклянной для консервирования: сравним уровень эффективности методов стерилизации и различных модификаций растворов. Всем глубокое уважение и признательность, за критический подход, ценные замечания и предложения!!!! Изменено 15.4.20 автор Kamariddin Shamsiev Изменено 15.4.20 автор Kamariddin Shamsiev
	2020-04-1515/04/2020 06:43:30 #2771498

Kamariddin Shamsiev Малёк 39 1 3 года	Ответить
	Ещё 50-150 мг ампицилина, 0,5 мг активированного угля и 1 мг аскорбиновой кислоты на литр раствора не помешает.
	2020-04-1515/04/2020 19:54:25 #2771721

Kamariddin Shamsiev Малёк 39 1 3 года	Ответить
	GIO В период адаптации водных растений, в том числе in vitro предлагаю использовать отвар зеленого чая в качестве удобрений и как антиоксидант и сок морковный или морковь целую или нарезанную, как удобрение. Состав близок к питательным растворам Андерсона и других Способ повышения эффективности ризогенеза растений in vitro с помощью кофеина https://health-diet.... https://health-diet....
	2021-03-0707/03/2021 11:43:15 #2880705

GIO Постоянный посетитель 794 174 Москва 10 дн.	Ответить
	Kamariddin Shamsiev не надо сваливать в одну кучу, in vitro и после in vitro, это разное, и в патенте совершенно про другое...
	2021-03-0707/03/2021 11:51:44 #2880708

Kamariddin Shamsiev Малёк 39 1 3 года	Ответить
	GIO Да, но до и после эти этапы взаимосвязанного процесса. После этого только проблема сбыта остаётся! А вместо ампициллина, теория и практика показывает, лучше гентамицин 0.1 мг/литр см. выше.
	2021-03-0808/03/2021 07:40:31 #2880999